CD47是一種廣泛表達的跨膜糖蛋白，也稱為整聯(lián)蛋白相關(guān)蛋白（IAP），分子量52 kDa。CD47的結(jié)構(gòu)包括與相應(yīng)配體相互作用的胞外可變區(qū)、高疏水性跨膜段形成的跨膜區(qū)和親水羧基端胞內(nèi)區(qū)，CD47激活后可以介導(dǎo)細胞增殖、遷移、吞噬以及細胞凋亡，免疫穩(wěn)態(tài)和抑制NO信號傳導(dǎo)等一系列過程。該蛋白具有免疫球蛋白可變的N端結(jié)構(gòu)域、5個跨膜結(jié)構(gòu)域和一個短的C端胞內(nèi)尾，胞內(nèi)尾部有四種可變不同剪接異構(gòu)體，從而形成4個亞型。CD47亞型2主要在造血細胞、血管內(nèi)皮細胞和上皮細胞中表達，1亞型在角質(zhì)形成細胞中表達，3和4亞型在神經(jīng)元細胞、腸粘膜細胞和睪丸細胞中均有表達。

SIRPα全稱為signal-regulatory protein α，是SIRP家族的第一個成員，于20世紀90年代末被鑒定出，表達在髓細胞上，包括所有類型的巨噬細胞。CD47與SIRPα的相互作用在1999年被發(fā)現(xiàn)，之后大量研究證實，CD47在正常細胞表面廣泛表達，通過與巨噬細胞表面的SIRPα結(jié)合，釋放一種“別吃我"的信號，從而保護健康細胞不被巨噬細胞“吃掉"。而癌細胞也學(xué)會了這一機制：在表面過量表達CD47，使巨噬細胞把它們當作“正常細胞"，從而逃避巨噬細胞介導(dǎo)的吞噬攻擊。

噬細胞是先天性免疫的重要組成部分，是一種“專業(yè)"的吞噬細胞，在人體內(nèi)可以通過吞噬衰老和死亡細胞起到人體清道夫的作用。在腫瘤組織中巨噬細胞可以通過吞噬作用清除腫瘤細胞，但是吞噬作用被CD47-SIRPα免疫檢查點通路抑制；當CD47和SIRPα結(jié)合后可以引起ITIM酪氨酸的磷酸化。磷酸化的ITIM隨后募集并激活酪氨酸磷酸酯酶SHP-1/2蛋白，活化后的酪氨酸磷酸脂酶進一步將細胞內(nèi)的一系列蛋白去磷酸化，失去相關(guān)的生物學(xué)功能最終起到抑制巨噬細胞吞噬功能的效果。這種功能在正常的人體環(huán)境里可以用于標記“自我"和“非我"，避免引起“誤傷"。

人們發(fā)現(xiàn)多種血液腫瘤及實體瘤細胞表面過表達CD47，可逃避巨噬細胞的免疫監(jiān)視，因此阻斷CD47-SIRPα通路近年成為腫瘤免疫治療的一個新興領(lǐng)域。目前，靶向該通路的在研藥物主要分為三大類，包括CD47抗體、SIRPα融合蛋白以及SIRPα抗體。這三類藥物中，CD47抗體備受關(guān)注，其研發(fā)也經(jīng)歷了不同的階段。初代以magrolimab為代表，但其可引起紅細胞凝集，同時由于與紅細胞結(jié)合力較強，易引發(fā)貧血等副作用。這些局限性催生了第二代CD47抗體，以CC9002、IBI188為代表，其避免了體外紅細胞凝集，但仍然可與紅細胞結(jié)合，臨床上通常采用預(yù)激給藥策略，以降低紅細胞毒性。第三代CD47抗體以TJC4（lemzoparlimab，來佐利單抗）、AK117為代表，其最大特點為不引起紅細胞凝集，且與紅細胞的結(jié)合低。

鑒于CD47-SIRPα信號能夠使惡性細胞逃避巨噬細胞介導(dǎo)的吞噬作用，抑制CD47-SIRPα信號軸是一種很有前途的癌癥治療策略，多種CD47靶向藥物已進入臨床試驗。然而，這類治療方法存在一系列生物安全性問題，包括貧血，臨床前研究已經(jīng)證明CD47靶向藥物對不同腫瘤類型的療效不同。此外，CD47-SIRPα復(fù)合物上游和下游的信號傳導(dǎo)機制還不清楚。更好地了解腫瘤細胞逃避免疫清除的機制，以及抗CD47藥物的給藥途徑的改進，將有助于開發(fā)新的、有效的抗癌治療方法，增強對惡性細胞的吞噬功能。

2024年5月15日，美國斯坦福大學(xué)醫(yī)學(xué)院的Crystal Mackall教授團隊在《Nature》雜志上發(fā)表了名為Engineered CD47 protects T cells for enhanced antitumour immunity的研究論文。作者設(shè)計了CD47的突變體CD47（Q31P）（47E），可以與SIRPα結(jié)合，并提供不被Anti-CD47抗體阻斷的“不要吃我"信號。表達47E的T細胞抗原受體（TCR）T細胞或嵌合抗原受體（CAR）T細胞在Anti-CD47抗體處理后可以抵抗巨噬細胞的清除，并介導(dǎo)大量、持續(xù)的巨噬細胞募集到腫瘤微環(huán)境中。作者的研究確定了巨噬細胞是T細胞持續(xù)存在的主要調(diào)節(jié)因子，并提供了一種能夠同時利用T細胞和巨噬細胞產(chǎn)生抗腫瘤作用的治療方法。

為了研究巨噬細胞的功能，作者使用了荷蘭liposoma的巨噬細胞清除試劑Clodronateliposomes氯膦酸鹽二鈉脂質(zhì)體，貨號CP-005-005來清除巨噬細胞。

Macrophage depletion and peritoneal lavage

NSG male or female mice (aged 6–10 weeks) were pretreated with intravenous injection with 200?µl of clodronate liposomes (Liposoma), followed by 400?µg of anti-mouse-CSF1R (AFS98; Bio X Cell) by intraperitoneal injection. Mice were treated with 400?µg of anti-CSF1R three times per week for the duration of the experiment. Then, 6?days after clodronate treatment, the mice were administered with 2?×?106 CD19-28ζ-nLuc CAR T cells intravenously, followed by 250?µg B6H12 intraperitoneally on day 7. T cells were quantified by nanoluciferase BLI before (day 7) and after (day 9) anti-CD47 treatment. Peritoneal lavage was performed on day 13 with 10?ml of FACS buffer and a 25?gauge needle. Peritoneal cells were collected, washed with FACS buffer and stained, before being run on the flow cytometry system (Supplementary Fig. 1j).